《300 勇士：帝国崛起》的故事紧接《300 斯巴达勇士》，薛西斯在获得神谕后变成「万王之王」，并率领波斯大军征伐希腊。希腊海军将领地米斯托克利意识到波斯人的威胁，他必须想办法联合雅典和斯巴达等城邦，共同对抗波斯。在海战中，地米斯托克利遭遇了波斯海军统帅阿特米西亚，她不仅美丽且心狠手辣，一心为父报仇。双方在海上展开了惊心动魄的对决，希腊舰队在不利的情况下顽强抵抗。最终，地米斯托克利凭借智慧和勇气，抓住时机发动反击，在萨拉米斯海战中大败波斯舰队，成功保卫了希腊的自由与独立。