影片以古希腊历史为背景，聚焦于斯巴达国王列奥尼达。波斯国王薛西斯率领号称百万的大军入侵希腊，妄图让希腊屈服。列奥尼达为了抵抗波斯的入侵，亲自挑选了 300 名斯巴达勇士，前往温泉关阻击敌军。在温泉关，他们凭借着狭窄的地形和顽强的战斗意志，一次次击退波斯军队的进攻。尽管面对数倍于己的敌人，300 勇士毫不退缩，奋勇杀敌。然而，叛徒埃菲亚特斯的出卖，让波斯军队找到了绕过温泉关的小路，300 勇士陷入了绝境。但他们依然坚守阵地，战斗到最后一刻，展现出了非凡的勇气和牺牲精神。这场战役虽然以斯巴达勇士的全部阵亡告终，但他们的事迹成为了希腊人抵抗外敌的精神象征。